體液外泌體NTA

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外泌體的體液體提取主要包括以下幾種方式:1、免疫磁珠法,外泌這種方法可以保證外泌體形态的體液體完整,特異性高、外泌操作簡單、體液體不需要昂貴的外泌儀器設備,但是體液體非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的外泌實驗。2、體液體PS親和法,外泌該方法将PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,體液體利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的外泌PS。該方法與免疫磁珠法相似,體液體獲得的外泌外泌體形态完整,純度較高。體液體由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體内注射。3、色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。外泌體的數量:人體中大約有1014個,近乎于平均每個細胞産生1000-10000個。體液外泌體NTA

體液外泌體NTA,外泌體提取試劑盒

外泌體病毒傳染:外泌體可以限制或促進病毒傳染。如IFNα或APOBEC3G等外泌體載體可通過限制病毒複制或增強抗病毒免疫來阻止傳染。病毒也可以劫持外泌體的生物發生機制來促進病毒的傳播。外泌體可以作為一個假包膜,通過四聚體蛋白(CD81,CD9)和PtSer相互作用增強病毒進入受體細胞,并幫助逃避抗病毒免疫。病毒組分(蛋白質和miRNA)的共轉運也可能增強傳染性。外泌體介導的病毒轉移可能參與了病毒的遺傳協同和多重傳染.(CMV,巨細胞病毒;HSV-1,1型疱疹病毒)。成都細胞上清外泌體外泌體的提取的方式:免疫磁珠法。

體液外泌體NTA,外泌體提取試劑盒

外泌體的提取、純化和鑒定:每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學性質所研發的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形态學(電子顯微鏡技術)、粒子大小以及标志蛋白等方式實現的。近來的研究發現外泌體在比較多生理病理上起着重要的作用,如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長與遷移、組織損傷的修複等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物标志物。外泌體具有脂質雙層膜結構,能比較好的保護其包被的物質,且能靶向特定細胞或組織,因此是一種比較好靶向給藥系統。

外泌體的相關成分:1、外泌體的膜同細胞一樣,是磷脂雙分子層。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,能綁定特異性的肽鍊。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌體膜中有膜轉運融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌體膜上有脂質筏Chol、ceramide、SM、PC,限制膜流動,參與包括跨膜信号轉導、物質内吞、脂質及蛋白定向分選的多種功能。6、外泌體中含有核酸,包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA;同時還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中。7、與外泌體産生相關的重要分子:Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物質進行外泌體中是特異性的:如hnRNPA2B1能結合lncRNA或miRNA特異性的序列(GGAG/CCCU),進行主動包埋。超速離心是目前分離外泌體的主要技術。外泌體産生于細胞中的多泡體。

體液外泌體NTA,外泌體提取試劑盒

人體内多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括内皮細胞、免疫細胞、血小闆、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而活躍靶細胞細胞内的信号通路。二是在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而活躍細胞内的信号通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。外泌體膜中有膜轉運融合蛋白annexins、RAN、GTPases。上海唾液外泌體

超速離心是目前分離外泌體的主要技術。體液外泌體NTA

外泌體的提取分離方法:1、超速離心法(差速離心):超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩定(可能與轉子類型有關),純度也受到質疑;此外,重複離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質量。2、密度梯度離心:在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續分布的密度階層,是一種區帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體将在1.13-1.19g/ml的密度範圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時。體液外泌體NTA

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